摘要 采用饱和盐水漂浮、重铬酸钾培养和饱和蔗糖溶液漂浮等方法,对肥东县某羊场81头山羊粪样进行了球虫虫卵检查。结果表明:山羊球虫感染率为96.30%;共检测到7种艾美耳属球虫,分别是浮氏艾美耳球虫、小型艾美耳球虫、颗粒艾美耳球虫、槌状艾美耳球虫、阿氏艾美耳球虫、雅氏艾美耳球虫和阿撒他艾美耳球虫;羔羊球虫中高度感染率为100%,成年山羊感染率为8.70%,羔羊较成年山羊易感染球虫;公羊中等强度以上感染率为46.67%,母羊为22.73%,二者差异性不显著。
关键词 山羊;球虫;感染率
中图分类号 S858.27 文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)18-0297-02
山羊球虫病是一种呈世界性分布的原虫病,球虫的发育无需中间宿主,当羊吞食散布在土壤、饲料和饮水中具有感染性的卵囊后,在肠道中子孢子逸出,在小肠内进行裂体生殖,产生裂殖子,裂殖子发育到一定阶段,形成大、小配子体并结合为卵囊,排出体外,在适宜的环境下形成孢子化具有感染性的卵囊[1-6]。在良好饲养管理条件下,球虫对山羊危害不大,虽在羊粪检查中可发现球虫卵囊,但一般为带虫者而不表现临床症状,易被人们忽视。 但当饲养管理条件和外界环境突然改变时,如突然更换饲料、天气突变和长途转运等,可导致机体免疫状态发生变化,从而引起抵抗力下降,潜伏在机体中的球虫便乘虚而入,使山羊发生球虫病[2]。球虫可引起山羊拉稀、消瘦、贫血、生长发育受阻和生产性能下降,严重时可导致死亡,尤其对羔羊的危害更大。
近年来,合肥市肥东县养羊业发展很快,但球虫病时有发生,给养殖户造成一定的经济损失。为掌握山羊球虫感染情况,防治山羊球虫病,该文对肥东县一羊场山羊球虫感染情况进行检测。现报告如下。
1材料与方法
1.1羊场环境
检测羊场位于合肥市肥东县文集村,东经117°28′,北纬31°53′。该地区属北亚热带季风气候,雨量适中,光照充足。羊场饲养模式属于半舍饲,4—10月放牧,10月之后圈养舍饲。
1.2粪样采集
分别采集不同年龄段山羊的新鲜粪便,每头采集10 g左右。将其置于干净的小塑料袋中,编号并记录山羊耳标号、年龄、品种、性别、体况和粪便外观等。将粪样带回实验室,保存于4 ℃冰箱中待检。
1.3卵囊的收集和镜检
从每个粪样中取3 g,捣碎搅匀,加3 mL饱和盐水捣匀,再加30 mL饱和盐水充分搅拌。用40目铜筛过滤,滤液静置30~40 min,再用直径为1.8 cm的铁丝圈在烧杯的不同位置蘸取2次表面液膜,涂片镜检。每个样本做3个涂片。在10×10倍镜下随机观察,并记录3个视野球虫卵囊个数。镜检观察到球虫卵囊的判为感染阳性,平均每个视野1~3个卵囊者判为轻度感染(+),4~6个卵囊者为中度感染(++),7个及其以上者为高度感染(+++)。将“++”和“+++”的粪样继续保留于4 ℃冰箱中待进一步试验。
1.4卵囊的分离培养
将“++”及“+++”阳性粪样集中起来置于烧杯中,捣碎并加自来水充分搅拌,用40目铜筛和260目尼龙筛兜分别过滤至塑料量杯中,并反复淘洗,再加自来水至近满,静置1.5 h。弃去上清液留下1/3左右,将剩下的粪液分装入离心管中,配平后3 000 r/min离心5 min,再弃去上清液。沉渣加25%重铬酸钾搅匀,并倒入洁净的培养皿中,标记后置于27 ℃培养箱中培养48~72 h至孢子化。孢子化开始后多次搅拌,保证培养皿内的孢子对氧的需求;24 h后间隔8 h搅拌1次。在培养箱内放置1杯水,以保持培养箱内的湿度。随着培养时间的推移,重铬酸钾培养液中的水分会丢失,丢失后培养液的浓度会升高,而不利于孢子化,要及时补充培养液中的水分。
1.5虫种鉴定
将球虫卵囊培养液倒入离心管中,3 000 r/min离心8 min,弃去上清液,沉渣加饱和蔗糖溶液搅匀,再次以同样速度离心15 min。然后用直径为1.8 cm的铁丝圈沾取表面液膜,在装有测微尺的显微镜下观察卵囊形态、大小,极帽、卵膜孔和外残体的有无,孢子囊大小,内残体和斯氏体的有无等,依据观察结果,初步判断虫卵种别。在40×10倍显微镜下校对,用目镜测微尺测量虫卵长宽,做好记录,与文献资料所叙述的虫卵大小进行比较,进一步判定虫卵种别。综合以上结果,确定虫卵种类。
1.6卵囊优势率计算
卵囊优势率=×100%。
2结果与分析
2.1山羊球虫感染率
在检测的81头山羊粪样中,78例球虫感染阳性,感染率96.30%;感染强度以轻度为主,轻(+)、中(++)、高(+++)3个强度等级的感染率分别为69.14%、19.75%和7.41%。
2.2山羊球虫种类
在81头山羊粪样中共检出7种艾美耳球虫,见图1~6。
(1)阿撒他艾美耳球虫(E. ahsata)卵囊呈长椭圆形,黄褐色,大小为30.00~36.50 μm ×20.00~24.50 μm,平均33.30 μm×22.10 μm,形状指数为1.47。孢子囊呈鱼形,有内残体、极粒、极帽和卵膜孔,无外残体和斯氏体。
(2)浮氏艾美耳球虫(E1faureiMoussu&Marotel,1901)。卵囊呈椭圆形,无色或绿色。测量20个孢子化卵囊,其大小为22.50~32.50 μm×17.50~27.50 μm,平均为28.20 μm×22.20 μm,形状指数为1.27。无极帽和外残体,有卵膜孔。孢子囊呈卵圆形,有内残体和极粒,斯氏体不明显。
(3)小型艾美耳球虫(E1parva Kotlan,Mocsy&Vadia,1929)。卵囊呈球形,双层壁。测量20个孢子化卵囊,其大小为15.00~20.00 μm×12.50~20.00 μm,平均大小为17.80 μm×16.60 μm,形状指数为1.07。无卵膜孔、极帽和外残体。孢子囊呈长卵圆形,有内残体和极粒,斯氏体不明显。
(4)阿氏艾美耳球虫(E1arloingi Marotel,1905)。卵囊呈椭圆形或稍卵圆形,两边较平直,淡黄绿色。测量10个孢子化卵囊,其大小为25.00~30.00 μm×15.00~20.00 μm,平均大小是27.80 μm×17.50 μm,形状指数为1.59。卵囊壁两层,有极帽和卵膜孔,无外残体。孢子囊呈长椭圆形,内残体由小颗粒组成,极粒一个或数个,有斯氏体。
(5)雅氏艾美耳球虫(E. ninakohlyakim oral)。卵囊呈卵圆形,黄色,大小为21.3~22.5 μm×17.5~20.0 μm,平均21.1 μm×19.2 μm,形状指数为1.15。有卵膜孔、内残体、斯氏体和极粒,没有极帽和外残体。膜双层。
(6)颗粒艾美耳球虫(E1granulosa Christensen,1938)。卵囊呈瓮状,上宽下窄。测量20个孢子化卵囊,其大小为27.50~37.50 μm×17.50~22.50 μm,平均大小是27.80 μm×17.50 μm,形状指数为1.59。卵囊壁2层,有极帽和卵膜孔,无外残体。孢子囊呈长椭圆形,内残体由小颗粒组成,极粒1个或数个,有斯氏体。
(7)槌状艾美耳球虫(E1crandallis Krilov,1961)。卵囊为宽椭圆形,透明,壁2层。测量10个孢子化卵囊,其大小为20.00~25.00 μm×17.50~25.00 μm,平均大小为23.75 μm×20.90 μm,形状指数为1.14。卵膜孔上有不明显极帽,无外残体。孢子囊为宽卵圆形,有内残体而无斯氏体。
2.3山羊各种球虫优势率
随机抽检60个球虫卵囊,鉴定种别并计算各种球虫优势率。结果显示,在山羊感染的7种球虫中,各种球虫的优势率分别为:雅氏艾美耳球虫22.5%;槌状艾美耳球虫15%;阿撒他艾美耳球虫13.33%;颗粒艾美耳球虫13.33%;小型艾美耳球虫8.75%;阿氏艾美耳球虫6.25%;浮氏艾美耳球虫2.5%。
2.4不同年龄山羊球虫感染情况
在81头检测羊中,羔羊11头,成年山羊46头。羔羊球虫中高度感染率为100%,成年山羊球虫中高度感染率8.70%,前者比后者高91.3个百分点,差异显著(P<0.05),表明羔羊比成年羊易感球虫。
2.5不同性别山羊球虫感染情况
在81头检测羊中,15头公羊全部为球虫感染阳性,中等强度以上感染率为46.67%;66头母羊中有63头球虫感染阳性,中等强度以上感染率为22.73%。前者比后者高23.94个百分点,但差异性检验不显著(P>0.05)。
3讨论
3.1山羊球虫感染与临床表现分析
该次检测发现,羊场山羊球虫感染率较高,这可能与调查季节、饲养方式有关。首先,调查季节正是冬季刚过、春暖花开的春季,气温已升高到球虫孢子化所需要的温度,环境中的球虫卵囊开始孢子化[10]。其次,该场羊群每天要外出放牧于草场,随着羊群迁移,接触受球虫污染的水和土壤的概率变高。
该次调查发现,山羊球虫感染率虽高,但有临床症状的山羊却很少。究其原因可能有以下几个方面:一是感染强度偏低,在检查卵囊感染率时,极少有一个视野里有5个以上卵囊者,往往几个视野才找到1个卵囊,可见感染强度较低;二是频繁的重复感染使机体产生一定的免疫力,再次接触感染源时,快速启动了再次免疫应答,从而抵抗感染[11];三是该场在调查前15 d注射过抗寄生虫药物伊维菌素,虽然未能彻底防止球虫的感染,但是对阻止球虫病的暴发可能起到积极的防控作用[12]。值得注意的是,虽然低强度球虫感染临床症状不明显,但可能造成易被人们忽视的慢性型球虫病,对生产危害较大,主要表现为感染羊生长受阻和生产性能下降。
3.2易感羊群分析
该次检测发现,羔羊易感且呈高强度感染。其原因可能在于,羔羊尚未建立起较为完善的免疫应答机制,初次被球虫感染就出现高感染的现象,甚至出现临床表现,如经常性腹泻等。随着年龄的增长,山羊机体发育逐渐完善,经多次启动细胞和体液免疫来抵抗球虫的侵袭,山羊对球虫的抵抗能力将逐渐增强,出现带虫免疫现象,球虫对羊的危害性降低。在生产实际中,要重点加强对羔羊球虫病的防治[13-14]。
该次检测发现,公羊的球虫感染强度比母羊高,但差异性检验不显著,这可能与检测样本数较少有关。对此,尚需进一步检测研究。
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