【摘要】 目的：探讨子宫癌组织中过氧化物酶体增殖体激活受体-1.4（PAR-1.4）蛋白质的表达及临床意义。方法：选择笔者所在医院2012年1-12月的54例宫颈癌患者，其中30例子宫颈癌组织、24例子宫颈上皮内瘤样（CIN）病变切片，选择同期的20例正常患者宫颈组织切片，采用免疫组织化学法检测，观察PAR-1.4蛋白质的表达，探讨其临床表现意义。结果：PAR-1.4在宫颈癌组织和CIN中的表达率分别为73.33%（22/30）、54.17%（13/24），均高于正常宫颈组织5.00%（1/20）的表达率（P<0.05）；鳞癌及腺癌的PAR-1.4阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；各临床分期和病理分级的PAR-1.4阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：宫颈癌组织中PAR-1.4的表达现在增高，对判断宫颈癌的发生、发展，指导临床的治疗有重要的参考价值。
【关键词】 宫颈癌； 免疫组织化学法； 子宫颈上皮内瘤样病变
中图分类号 R737.33 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2014）2-0058-02
据文献[1]报道，过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferators-activated receptors，PAR）主要是有配体激活的核转录因子，属于Ⅱ型核受体超家族。宫颈癌在全球女性肿瘤中的发病率位居第3位，病死率也较高[2]。近几年来，PAR-1.4对肿瘤细胞的影响越来越受到医学界的重视，其属于配体依赖型转录因子，其可以诱导细胞的分化、凋亡并抑制肿瘤的生长[3]。本研究采用了免疫组织化学法对宫颈癌组织中的PAR-1.4因子的表达进行检测，以探讨PAR1.4在宫颈癌组织中的表达及临床意义，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择笔者所在医院2012年1-12月54例宫颈癌患者作为试验组，其中30例子宫颈癌组织，24例子宫颈上皮内瘤样（CIN）病变切片。另选择同期的20例正常患者宫颈组织切片作为对照组。所有标本均经临床及组织病理诊断证实。
1.2 试剂
采用兔抗人PAR-1.4多克隆抗体（购于诶过Santa Cruz公司），免疫组织化学SABC试剂盒、DAB试剂盒。
1.3 方法
所有标本（0.4 μm）10%甲醛溶液浸泡固定，石蜡包埋，进行常规的HE染色，光镜下行细胞形态学观察，确定病理诊断。免疫组织化学染色法采用En Vision二步法，按照试剂盒的说明书进行操作。一抗工作液体稀释比例为1∶200，脱蜡、水化组织切片，进行酶修复或者热修复，蒸馏水漂洗，放置于TBS中，滴加3.5%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，孵育15 min。然后再次采用蒸馏水进行漂洗，置于TBS中放置10 min，一抗孵育10～30 min，后再用TBS漂洗10 min，色源底物溶液DAB或者AEC孵育，光镜控制显色，蒸馏水漂洗，复染及封片。TBS替代一抗、二抗作为阴性对照。
1.4 判定标准
主要参考Jung等[4]实验中的判定标准，PAR-1.4阳性染色主要呈现棕黄色至深棕色颗粒状，每个视野下计数100个细胞，阳性细胞数占全部计数细胞的百分比≥5%为阳性表达，<5%为阴性表达。
1.5 统计学处理
采用SPSS 15.0统计学软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，进行t检验，计数资料采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 PAR-1.4在宫颈癌、CIN及正常组织中的表达
PAR-1.4在宫颈癌组织和CIN中的表达率分别为73.33%（22/30）、54.17%（13/24），均高于正常宫颈组织5.00%（1/20）的表达率（P<0.05）。
2.2 PAR-1.4 蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的关系
鳞癌及腺癌的PAR-1.4阳性率比较，差异有统计学意义（字2=56.73，P<0.05）；各病理分级和临床分期的PAR-1.4阳性率比较，差异均无统计学意义（字2=1.63，P>0.05；字2=0.49，P>0.05），详见表1。
3 讨论
过氧化物酶增殖物激活受体（PAR）是细胞核荷尔蒙受体家族[5]。目前为止，研究中发现PAR家族主要包含了3个主要的亚型。在宫颈癌、子宫内膜癌、胃癌、肝癌、胰腺癌中呈高度的表达性，通过与靶基因增强子中的过氧化物增殖反应元件结合，从而参与到细胞增殖、凋亡与终末分化的过程[6]。PAR-1.4是凝血酶的主要的受体，人类PAR-1.4基因位于染色体5q13上，1991年主要由Vu等[7]首次发布出你序列，PAR-1.4为单链多肽，主要由425个氨基酸组成，主要是有含有其自身内在配体的多肽受体，凝血酶以蛋白裂解的方式，暴露出一个新的被限制的配体，使其进行不可逆的激活，继而转导其他的细胞信号。
PAR-1.4与某些配体噻唑烷二酮类药物、脂肪酸等结合，从而起到了抑制人类多种恶性肿瘤的生长。研究结果中显示，PAR-1.4蛋白在宫颈癌组织中的表达率为73.33%，与子宫颈上皮内瘤样（CIN）病变54.17%、正常宫颈组织5.00%的表达率比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。鳞癌及腺癌的PAR-1.4阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；各临床分期和病理分级的PAR-1.4阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05），结果表明PAR-1.4蛋白的表达可能与临床的分期和病理的分级无明确的关系。
综合上述分析，据文献[8]报道，由于PAR体系需要被配体激活后才发挥相应的作用。因此，PAR-1.4及其配体的研究对宫颈癌的治疗具有一定的临床意义，有可能成为以后临床宫颈癌患者治疗的新靶点。
参考文献
[1]凌波，张家文，陈岚.PPAR-1在宫颈癌中的研究进展[J].中国妇产科临床杂志，2005，6（4）：312-314.
[2]Jemal A，Bray F，Center M M，et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90.
[3]Shikary T，Bernstein D I，Jin Y，et al. Epidemiology and risk factors for human papillomavirus infection in a diverse sample of low-income young women[J].J Clin Virol，2009，46（2）：107-111.
[4]Jung T I， Baek W K， Suh S I， et al.Down-regulation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma in human cervical carcinoma[J].Gynecologic Oncology，2005，97（1）：365-373.
[5]叶劲军，黄健，王海蓉，等.PPAR和P27在宫颈癌组织中的表达及其临床意义[J].临床肿瘤学杂志，2011，16（5）：433-435.
[6]金志军，徐晶，谢康云，等.宫颈癌组织中蛋白酶活化受体-1的表达与盆腔淋巴结转移的关系[J].生殖与避孕，2008，28（5）：283-287.
[7]Vu T K H，Huang D T，Wheaton V I，et al.Molecular cloning of a functional thrombin receptor reveals a novel proteolytic mechanism of receptor activation[J].Cell，1991，64（6）：1057-1068.
[8]关永红，邹颖刚，于晓艳.PPAR在子宫颈癌组织中的表达及意义[J].中国实验诊断学，2010，14（8）：1203-1205.
（收稿日期：2013-09-18） （编辑：朱姣）