摘要：试验采用菌丝生长抑制法测定了25%凯润EC、25%阿米西达SC、10%世高WG、70%甲基托布津WP、80%大生M-45 WP、50%速克灵WP 6种杀菌剂对枣（Ziziphus jujuba Mill）黑斑病菌（Alternaria alternate）的室内活性。结果表明，6种杀菌剂对枣黑斑病菌均有抑制效果，但抑制效果存在显著差异。其中25%凯润EC、25%阿米西达SC、10%世高WG、70%甲基托布津WP对枣黑斑病菌都有较好的抑制作用，抑制中浓度（EC50）分别为0.032 5、13.403 6、39.872 2、54.254 0 μg/mL；80%大生M-45 WP、50%速克灵WP对枣黑斑病菌的抑制效果较差，EC50分别为325.890 7 μg/mL和629.806 3 μg/mL。
关键词：枣（Ziziphus jujuba Mill）；黑斑病菌（Alternaria alternate）；室内毒力测定
中图分类号：S482.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）14-3451-03
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.14.030
The Indoor Toxicity Measurement of Six Fungicides
against Jujube Black Spot
HAN Feng-ying， QIN Yong-mei，XU Zheng，WANG Yu， WANG Jin-quan， YANG Xiang-li
（Shandong Agricultural and Engineering University， Jinan 250100，China）
Abstract： The mycelial growth rate methed was used to test the indoor toxicity of six fungicides 25% pyrazole ether ester EC，25% Amistar SC，10% difenoconazole WG，70% mildothane WP，80% mancozeb WP， 50% procymidone WP aginst jujube black spot （Alternaria alternate）.The results showed that 6 fungicides had inhibition effects to jujube black spot（Alternaria alternate），which had significant different inhibitory effect. 25% pyrazole ether ester EC，25% Amistar SC，10% difenoconazole WG and 70% mildothane WP had good inhibition，median inhibition concentration （EC50） were 0.032 5，13.403 6，39.872 2，54.254 0 μg/mL respectively； While 80% mancozeb WP，50% procymidone WP had poorer inhibition effect to jujube black spot，EC50 were 325.890 7 μg/mL and 629.806 3 μg/mL respectively.
Key words： jujube（Ziziphus jujuba Mill）； black spot（Alternaria alternate）； indoor toxicity
枣（Ziziphus jujuba Mill）黑斑病俗称枣斑点病，是由细链格孢菌（Alternaria alternate）引起的一种真菌性病害[1，2]，为害冬枣果实和叶片，该病对冬枣的产量和品质影响极大[3]。近年来，山东省枣黑斑病发生较重，滨州等地枣园发病率为100%，一般年份病果率在25%以上，管理粗放、防治不及时的枣园病果率在60%以上[4]，严重影响了冬枣的经济效益，是生产上亟待解决的问题。为此，本研究测定了6种化学药剂对枣黑斑病的室内毒力，以期为枣黑斑病菌的科学防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 供试病原菌株
枣黑斑病菌（A. alternate）样品采自滨州市，于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上按常规方法进行组织分离和病原纯化，获得纯培养菌株，于4 ℃条件下保存备用。
1.2 培养基
PDA培养基：马铃薯200 g；葡萄糖20 g；琼脂15～20 g；去离子水1 000 mL，pH7.0，于121 ℃灭菌20 min，冷却后贮存备用。
1.3 供试药剂
25%凯润（吡唑醚菊酯）EC（德国巴斯夫（中国）有限公司），25%阿米西达（醚菊酯）SC（瑞士先正达（苏州）作物保护有限公司），10%世高（苯醚甲环唑）WG（瑞士先正达（苏州）作物保护有限公司），70%甲基托布津WP（浙江一帆化工有限公司），80%大生M-45 WP（代森锰锌）（美国陶氏益农化工有限公司），50%速克灵（腐霉利）WP（日本住友化学株式会社）。
1.4 试验方法
采用菌丝生长速率法[5，6]测定6种杀菌剂对枣黑斑病菌的生长抑制效果。将枣黑斑病菌在PDA培养基上28 ℃培养5 d，用直径9 mm的打孔器在靠近菌落边缘处打取菌饼，并接种于含有不同药剂浓度的培养基上（凯润：0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 μg/mL；阿米西达：4、8、16、32、64 μg/mL；世高：15、30、60、120、240 μg/mL；甲基托布津：10、20、40、80、160 μg/mL；大生：150、300、600、1 200、2 400 μg/mL；速克灵：100、200、400、800、160 0 μg/mL），每个平皿接一菌饼，28 ℃培养5 d，利用十字交叉法测定菌落直径，计算菌丝生长抑制率。每处理重复3次。将供试病菌9 mm的菌饼接种于不含药剂的平皿中央，28 ℃培养，待对照菌落长满平皿，采用十字交叉法测定菌落直径。计算菌丝相对抑制率[7]，利用DPS软件进行统计分析，求出各药剂对枣黑斑病菌的毒力回归方程、抑制中浓度（EC50）、及相关系数（R）、95%置信限。
相对抑制率=（对照菌落平均直径-处理菌落平均直径）/（对照菌落平均直径-菌饼直径）×100%
2 结果与分析
6种化学药剂在不同剂量下对枣黑斑病菌的抑制作用如表1所示。由表1可知，6种化学药剂对枣黑斑病菌均有一定的抑制作用，但同一种药剂PDA不同的含药浓度抑制效果有很大的差别，高浓度下的抑制率均达80%以上。
根据菌丝生长抑制率与药剂浓度对数之间的关系，通过DPS2000软件数据分析得出毒力回归方程、EC50、相关系数、95%的置信限，如表2所示。由表2可知，不同药剂之间EC50差别很大，其中凯润对枣黑斑病菌菌丝生长的抑制作用最强，EC50为0.032 5 μg/mL，阿米西达对枣黑斑病菌菌丝生长的抑制作用次之，EC50为13.403 6 μg/mL，甲基托布津和世高也对枣黑斑病菌菌丝生长均显示出良好的抑制作用，EC50分别为39.872 2、54.254 0 μg/mL。速克灵和大生虽对枣黑斑病菌菌丝生长有一定作用，但使用剂量太大，EC50分别高达325.890 7、629.806 3 μg/mL，毒力较低，不适合用于防治枣黑斑病菌。
3 小结与讨论
6种化学药剂对枣黑斑病菌生长抑制的中浓度从低到高依次是凯润、阿米西达、甲基托布津、世高、大生、速克灵，分别为0.032 5、13.403 6、39.872 2、54.254 0、325.890 7、629.806 3 μg/mL。其中凯润对枣黑斑病菌的菌丝生长抑制作用最强，其次是阿米西达。甲基托布津和世高对枣黑斑病菌菌丝的生长也有良好的抑制作用；大生和速克灵相对其他药剂抑制枣黑斑病菌菌丝的生长作用较差。
不同杀菌剂对病原菌的抑制作用差异显著，可能与杀菌剂的作用原理关系密切。凯润和阿米西达两种药剂属于甲氧基丙烯酸酯类，甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂主要作用于真菌的线粒体呼吸，破坏能量合成，从而抑制真菌的生长或将病菌杀死，具有保护和治疗活性[8]，具有渗透性及局部内吸活性，持效期长，耐雨水冲刷[9]。甲基托布津被植物吸收后即转化为多菌灵，主要干扰病菌菌丝形成，影响病菌细胞分裂，使细胞壁中毒，孢子萌发长出的芽管畸形，从而杀死病菌[10]。世高属于三唑类杀菌剂，其杀菌机制均是抑制大多数真菌的麦角甾醇的生物合成，从而抑制或干扰病菌的一些繁殖体及营养体器官的正常发育而令病菌衰亡。这4种杀菌剂对作物均具有保护和治疗作用。速克灵属于二甲酰亚胺类杀菌剂能使病菌菌体破裂死亡，防止早期病斑形成，起保护和治疗作用。大生属于有机硫类杀菌剂，属于保护性杀菌剂，主要抑制孢子的萌发，使芽管膨大变形[11]。
通过室内试验研究表明，甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂（凯润、阿米西达）、甲基托布津及世高对枣黑斑病菌的抑制作用较好。如果以上4种药剂经田间药效试验得到进一步的验证，则可能成为防治枣黑斑病菌的高效药剂，在枣黑斑病菌防治的工作中具有较大的应用潜力。
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