[摘要] 目的 探讨南瓜多糖体内体外的抗肿瘤作用以及对红细胞免疫功能的影响。 方法 （1）MTT法检测南瓜多糖对H22细胞增殖的影响。（2）建立H22荷瘤小鼠肿瘤模型，观察南瓜多糖对瘤块重量及红细胞免疫吸附肿瘤细胞能力的影响。 结果 南瓜多糖可抑制H22细胞增殖，中高剂量组细胞生长抑制率分别为33.7%、40.3%，与对照组相比有显著差别。南瓜多糖可抑制肿瘤的生长，抑瘤率为55.8%，与对照组相比有显著差别。南瓜多糖可增强红细胞免疫吸附能力。 结论 南瓜多糖具有一定的抗肿瘤及提高免疫活性的作用。
[关键词] 南瓜多糖；抑瘤率；细胞增殖；红细胞免疫吸附
[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）02（a）-0017-02
Research of antitumor and RBC immune adsorption enhancement with Pumpkin Polysaccharide
WANG ChuandongLAN TianGUO XiaodongSHI XuejunLV Bingbing
Department of Radiotherapy, Anqiu People"s Hospital of Shandong Province, Anqiu262100, China
[Abstract] Objective To study the antitumor and red blood cell immune adsorption enhancement action of Pumpkin Polysaccharides internal and external. Methods (1)MTT method for detected the Pumpkin polysaccharide effect to H22 cell proliferation. (2)Established H22 tumor-burdened mice model, to observed the effect of pumpkin polysaccharide to tumor weight and red blood cells immune adsorption ability to tumor cells in tumor-burdened mice. Results Pumpkin polysaccharide could inhibits H22 cell proliferation, the inhibition ratio of middle and high dose group was 33.7% and 40.3% respectively, compared with control. Pumpkin polysaccharide could inhibit tumor growth in tumor-burdened mice, the inhibition ratio was 55.8% compared with the controls for a significant difference. Pumpkin polysaccharide could enhance immune adsorption capacity of red blood cell. Conclusion Pumpkin polysaccharide has certain antitumor and immunity enhancement action.
[Key words] Pumpkin Polysaccharide; Cell proliferation; Inhibition ratio; RBC immune adsorption
南瓜（Cucurbita，spp）是葫芦科南瓜属的一年生草质藤本植物。临床实践证实，南瓜多糖（Pumpkin polysaccharide，PP）是南瓜成分中最重要的活性成分，它直接参与了降血糖、调血脂等有关活动[1-4]。近年来对南瓜多糖的其他作用研究成为热点，它是非细胞毒性物质，毒副作用小，而且药物质量可通过化学手段控制，在医药学领域有着广阔的应用前景[5-6]。目前南瓜多糖对恶性肿瘤影响的研究还有待深入，进一步探讨南瓜多糖的抑瘤作用及对免疫的影响，以寻找和开发新的天然、无毒的抗肿瘤药物将有深远的医用和经济意义。
1 材料与方法
1.1 实验材料
南瓜多糖购自泰安中荟植物生化有限公司、DMEM培养液、胎牛血清、环磷酰胺、0.9%氯化钠溶液、肝素、蒸馏水、MTT磷酸缓冲液、甲暇颗粒、DMSO。
1.2 动物
昆明种小鼠60只，18～22 g，雌雄各半，小鼠肝癌H22细胞株。
1.3 仪器
试管、烧杯、毛细管、天平、吸管、干燥器、离心机、培养箱、培养瓶、96孔培养板、酶标仪、注射器、显微镜。
1.4 实验方法
1.4.1 MTT法检测H22细胞增殖
取处于对数生长期且台盼蓝拒染率大于95%的H22细胞，1 000 r/min，离心10 min，用DMEM培养液（含10%胎牛血清）将沉淀细胞浓度调为1×105 cell/mL细胞悬液后，将细胞接种于96孔培养板。每孔加细胞悬液100 μL（1×104 cell），然后分别加入不含药物的培养液、浓度分别为：10 μg/mL和20 μg/mL的南瓜多糖和环磷酰胺5 μg/mL各100 μL，每孔4个平行孔，使总体积达200 μL。调零孔不加H22细胞悬液，只加含10%胎牛血清的DMEM培养液200 μL。混匀后置37℃、5%CO2、95%湿度条件下培养44 h后，每孔加入5 mg/mL 的MTT磷酸缓冲液20 μL，同样条件下继续培养4 h，终止培养。1 000 r/min，离心5 min，然后弃去培养板孔内的培养液，每孔加入150 μL DMSO，震荡10 min，酶标仪检测吸光值。选择测定波长570 nm，参考波长655 nm。
1.4.2 南瓜多糖对小白鼠的抑瘤作用及对淋巴细胞的影响
1.4.2.1 荷瘤小鼠模型的建立 无菌条件下取传代6～7 d的H22肝癌小鼠腹水，用0.9%氯化钠溶液稀释成含量为1×10/mL的细胞悬液。小鼠右侧腋窝皮下接种0.2 mL细胞悬液制备实体瘤模型。
1.4.2.2 分组及给药 将接种H22细胞24 h后的小鼠随机分为3组，每组20只，雌雄兼有，并于同一天开始分别给药。阳性对照用安瘤乳每日灌胃0.4 mL，剂量为0.5 mg/mL。治疗组用南瓜多糖每日灌胃0.4 mL，剂量为10 mg/mL，空白对照组用0.9%氯化钠溶液每日灌胃0.4 mL ，连续给药7 d。
1.4.2.3 分项检查 于第8日眼底动脉取血，肝素抗凝，检测各组红细胞免疫吸附肿瘤细胞能力。取出瘤块并称重。
1.4.2.4 结果分析方法 南瓜多糖对H22细胞的生长抑制率采用公式进行计算，即H22细胞的生长抑制率（%）＝（１－试验孔OD570/对照孔OD570）×100%。南瓜多糖对荷瘤小鼠的抑瘤率采用公式进行计算，即抑瘤率（%）=（1-T/c）/100% ，式中T=给药组平均瘤重，c=对照组平均瘤重。南瓜多糖对荷瘤小鼠胸腺的增重率（%）=[（治疗组平均胸腺重-对照组平均胸腺重）/对照组平均胸腺重]×100%。各组小鼠均用眼底取血，肝素抗凝，分离出红细胞，红细胞免疫吸附肿瘤细胞能力的测定按郭峰法[7]改进，结合3个以上红细胞的肿瘤细胞为1个花环。
1.5 统计学处理
对所得数据进行χ2及t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 南瓜多糖对H22细胞增殖的影响
南瓜多糖对H22细胞的生长抑制率采用公式进行计算，即H22细胞的生长抑制率（%）＝（１－试验孔OD570/对照孔OD570）×100%。见表1。
2.2 南瓜多糖对荷瘤小鼠肿瘤细胞生长的抑制作用
南瓜多糖对荷瘤小鼠的抑瘤率采用公式进行计算，即抑瘤率%=（1-T/c）/100% ，式中T=给药组平均瘤重，c=对照组平均瘤重。见表2。
2.3 南瓜多糖对红细胞免疫吸附肿瘤细胞能力的影响
红细胞免疫吸附肿瘤细胞能力的测定按郭峰法改进，结合3个以上红细胞的肿瘤细胞为1个花环。见表3。
3 讨论
自20世纪50年代末人们发现真菌多糖具有抗肿瘤活性以来，多糖的研究受到越来越广泛的关注。多糖是由单糖连接而成的生物大分子物质，多糖的糖链能控制细胞的增殖和分化，调节细胞的生长与衰老，在抗肿瘤和促进免疫力方面疗效明确[5-6]。本实验从肿瘤细胞增殖、瘤重、红细胞免疫功能多项指标的观察表明，南瓜多糖可抑制小鼠H22的增殖，高中低剂量组平均生长抑制率分别为40.3%、33.7%、28.5%，与空白对照组相比差异有统计学意义，其中高剂量组接近环磷酰胺平均生长抑制率；南瓜多糖可降低荷瘤小鼠瘤重，抑瘤率为55.8%，接近阳性对照安瘤乳抑瘤率；以上实验证明南瓜多糖具有一定的抑制肿瘤生长作用。
有研究表明，植物多糖抑制肿瘤的效果，不是直接作用于肿瘤细胞，而可能是通过提高生物机体对肿瘤细胞的防御能力和增强宿主免疫系统的功能来实现的[8-10]，其中红细胞膜上具有黏附活性的C3b受体（CR1），通过CR1 癌细胞可黏附于红细胞上，易被吞噬细胞捕捉吞噬[11-12]。因此，笔者观察了南瓜多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫吸附肿瘤细胞的影响，南瓜多糖组红细胞免疫吸附肿瘤细胞的能力明显高于肿瘤空白对照组，P < 0.01，与安瘤乳组相近，表明南瓜多糖具有激活补体的作用，且可增强红细胞对肿瘤细胞的免疫吸附。
本文通过动物实验和细胞实验，发现南瓜多糖具有延缓与抑制肿瘤生长的作用，还可提高红细胞的免疫吸附功能。南瓜多糖作为一种天然的潜在抗肿瘤物质值得进一步研究。
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（收稿日期：2011-09-08）