对照，置于25 ℃培养室中，以15 h/d光照培养，1个月后观察草胺膦对黄芩植株生长的影响。
1.2.2 草胺膦对愈伤组织生长的影响 选取生长疏松的淡绿色黄芩愈伤组织分别接种在草胺膦浓度为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mg/L的继代培养基上，每种浓度梯度的培养基接种6瓶，每瓶接入7粒愈伤组织。置于25 ℃培养室中，以15 h/d光照培养，1个月后观察记录愈伤组织的生长、褐化和死亡情况。
1.2.3 草胺膦对愈伤组织分化的影响 将继代培养且生长疏松的淡绿色愈伤组织分别接种在草胺膦浓度为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mg/L的分化培养基上，每种培养基接种6瓶，每瓶接入7粒愈伤组织。置于25 ℃培养室中，以15 h/d光照培养，观察愈伤组织的分化情况。培养2～3周后，统计愈伤组织的分化率。
2 结果与分析
2.1 草胺膦对黄芩植株生长的影响
接种植株一月后观察植物的外观性状。由表l可知，黄芩植株对草胺膦有一定的天然耐受性。在草胺膦浓度低于10 mg/L时，植株生长基本不受影响；当浓度达到10 mg/L，叶片开始出现枯斑；当草胺膦浓度达到30 mg/L，叶片才完全枯死。因此在进行黄芩转bar基因抗性植株的筛选时，草胺膦的浓度应该大于30 mg/L，以避免假阳性植株的出现。
2.2 草胺膦对愈伤组织生长的影响
由表2可知，在加有除草剂草胺膦的培养基上，愈伤组织增殖率明显下降，随着除草剂浓度的升高，愈伤组织褐化率也相应增高，大多数愈伤组织直接褐化死亡；存活的愈伤组织疏松程度逐渐降低，增殖受到影响。当草胺膦浓度为1.0 mg/L时，愈伤组织的褐化率只有23.8%；当草胺膦浓度上升至4.0 mg/L时，愈伤组织的生长受到了明显的抑制。没有分化的愈伤组织褐化坏死。当草胺膦浓度为3.5 mg/L时，褐化率为95.2%，是较为合适的筛选浓度。
2.3 草胺膦对愈伤组织分化的影响
为了进一步确定草胺膦对黄芩愈伤组织分化的影响，挑取各种浓度草胺膦下未褐化死亡的细胞进行再分化，由表3可知，当草胺膦浓度为3.0 mg/L时，尚有极少数愈伤组织能形成绿点，并最终形成幼苗，当草胺膦浓度大于3.0 mg/L时，却没有绿点形成，也没有苗形成。可见3.0 mg/L草胺膦对黄芩来说已经是有效的抑制分化浓度了，故在进行黄芩转bar基因抗性愈伤组织分化的筛选时，草胺膦的浓度以3.0 mg/L较为合适。
3 讨论
草胺膦是一种非选择性除草剂，具有杀草谱广、低毒、内吸好、活性高和环境相容性好等特点，也是全球第二大转基因作物耐受除草剂，应用前景十分广阔[11]。不同植物对草胺膦的耐受性不同。在植物转基因试验过程中，需要研究目标植物对该除草剂的耐受性。
试验结果显示除草剂草胺膦对黄芩愈伤组织的抑制作用远大于对植株的作用。对愈伤组织，草胺膦浓度为3.0～3.5 mg/L可以有效抑制愈伤组织的生长分化；而对黄芩植株，草胺膦的浓度则需达30 mg/L才可以完全抑制其生长。因此，在进行黄芩转bar基因抗性植株的筛选时，草胺膦的浓度应该大于30 mg/L。
草胺膦对愈伤组织的生长和分化均有强烈的抑制作用。从试验结果可以看出，草胺膦对黄芩愈伤组织的分化比对愈伤组织的生长具有更强的抑制作用，在同一种草胺膦浓度下，愈伤组织分化的褐化速率大于愈伤组织生长的褐化速率；草胺膦对愈伤组织分化的筛选浓度3.0 mg/L小于愈伤组织生长的浓度3.5 mg/L。
对转化后的愈伤组织，选择培养时筛选临界浓度的选择至关重要，太高可能导致愈伤组织大量死亡，太小又容易出现假阳性。因此在做转化试验时，可根据筛选临界浓度和愈伤组织生长状态来确定草胺膦的使用浓度。
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